体液样本通常包括:胸水、腹水、脑脊液、心包液、关节液等。
脑脊液:
脑脊液为无色透明的液体,充满在各脑室、蛛网膜下腔和脊髓中央管内。正常脑脊液具有一定的化学成分和压力,对维持颅压的相对稳定有重要作用。
浆膜腔液:
正常情况下,浆膜腔内有少量液体起润滑作用。若有多量液体贮留,形成积液,即为病理变化。这些积液因部位不同而分别称为胸膜积液(胸水)、腹膜积液(腹水)、心包积液等。临床上分为漏出液和渗出液两类,漏出液为非炎症所致,渗出液为炎症、肿瘤所致。
关节液:
一般关节液量极少,病理时关节液量、细胞数均有所增加。
体液检查:
理化:颜色、透明度、蛋白定性
细胞及形态学:细胞计数及分类、细胞形态观察
病原生物:真菌、细菌、寄生虫等
其他形态:如结晶、狼疮细胞
体液采集注意事项:
脑脊液:
标本采集容器:干燥无菌小试管
1、标本采集:医院进行采集,无菌操作。脑脊液抽取后一般分装三个无菌管每管1-2ml。第一管作细菌培养(无菌小试管中),第二管作化学分析和免疫学检查,第三管作一般性状及显微镜检查,三管的顺序不宜颠倒。因标本采集较难,全部送检和检测过程应注意安全。
2、抽取后应立即送检,一般不能超过1小时。收到标本后应立即检测,久置可致细胞破坏,影响细胞计数及分类检查;葡萄糖含量降低;病原菌破坏或者溶解。
3、细胞计数管应避免凝固,遇高蛋白标本时,可用EDTA紫色抗凝管抗凝。
胸水/腹水
标本采集容器:(胸水/腹水常规)紫色EDTAk2抗凝管+干燥清洁试管各一支,(胸水/腹水生化、免疫检查)干燥清洁试管各一支,(胸水/腹水细菌培养)干燥无菌管
1、标本采集:医院进行采集,无菌操作。腹水/胸水取后一般分装三个无菌管每管1-2ml。第一管作细菌培养(无菌小试管中),第二管作化学分析和免疫学检查,第三管作一般性状及显微镜检查,三管的顺序不宜颠倒。
2、抽取后应立即送检,常规检查谨记要抽紫色EDTAk2抗凝管,否则体液自凝无法进行上机检测。
关节液:
关节液收集应用消毒注射器,正常时滑膜液量甚少,病理时则可多达3-10ml时,因检查项目不同、容器不同,故应事先准备有关标本容器,微生物培养应置于灭菌消毒试管,显微镜镜检应用肝素抗凝标本,每毫升约用肝素铀25单位(不可采用肝素锂、草酸盐或EDTA干粉,以免人为形成晶体,干扰显微镜检查),如有可能,患者宜空腹4-6h,以达到血液内组分与滑膜内组分平衡,且血液标本应与滑膜液标本在同一时间内收集。收集后立即送检。
标本检测:
对于细胞计数及其分类:我科采用SysmexXN或者XE系列全自动血液体液一体机体液模式进行检测。
SysmexXN体液检测模式根据细胞内核酸含量的多少进行荧光定量,检测参数高荧光细胞(HF?BF#)为核酸含量较高细胞类型包括肿瘤细胞、白血病细胞、间皮细胞、分裂活跃的细胞等。分裂活跃的细胞,体液中恶性肿瘤细胞分裂比正常的组织细胞活跃,在体液检测模式下表现为较高的高荧光细胞计数。国内外已有文献报道,采用仪器对体液标本进行自动化检测[1-2],可提高检测效率。SysmexXN是新一代全自动血液体液分析仪,并具备独立的体液模式-BF。细胞检测原理为流式细胞术加核酸荧光染色方法。根据细胞内核酸含量的多少进行荧光定量,侧向荧光(SFL)反映细胞核酸含量,侧向散射光(SCC)测定细胞内容物的复杂程度。具有相对精确和灵敏的计数及鉴别功能。获得以下参数及散点图。其独立的体液模式-BF,标本无需预先处理。检测结果除了提供脑脊液、胸腔积液、腹水等体液中的白细胞计数及分类,同时其提供的参数中,高荧光细胞(HF?BF#)可用于筛查肿瘤细胞,在DIFF散点图中,WBC?BF领域存在荧光较强的区域,高荧光细胞(HF?BF#)是该区域出现的粒子数[3]。高荧光细胞比率(HF?BF%)是WBC?BF中HF?BF占的百分率。检验科设置当高荧光细胞百分比HF=BF%5%的时候,要求体液标本离心涂片染色镜检。
上机后,结果如下:
XN系列散点图:
XE-体液散点图
诊断参数
WBC-BF:体液WBC数
RBC-BF:体液RBC数
MN%、#:单个核细胞百分比、计数
PMN%、#:多个核细胞百分比、计数
研究参数
TC-BF#、%:有核细胞总数、百分比
HF-BF#、%:体液中高荧光细胞计数、百分比
EO-BF#、%:体液中嗜酸细胞计数、百分比
临床意义:
1、浆膜腔积液细胞计数及分类临床意义:
漏出液
渗出液
病因
非炎症
炎症、肿瘤
外观
淡黄
不定,可为黄色、血色、脓样
透明度
透明、偶见微混
多为混浊
比重
1.
1.
凝固
不凝
常自凝
粘蛋白试验
阴性
阳性
蛋白质定量
25g/L
30g/L
葡萄糖
3.3mmom/L
可变化,常3.3mmol/L
细胞总数
常×/L
常×/L
白细胞分类
以淋巴细胞(MN)及间皮
细胞为主
根据不同病因而异,一般炎症急
性期以中性粒细胞(PMN)为主,
慢性期以淋巴细胞(MN)为主
癌细胞
未找到
可找到癌细胞或异常染色体
细菌
未找到
可找到病原菌
常见疾病
充血性心力衰竭肝硬化
和肾炎伴低蛋白血症
细菌感染、原发性或转移性肿
瘤、急性胰腺炎等
2、脑脊液细胞计数及分类临床意义:
3、关节液
细菌性关节炎、尿酸性关节炎和类风湿性关节炎:中性粒细胞80%。
类风湿性关节炎:淋巴细胞增高。
滑膜转移癌、急性风湿热类风湿性关节炎及关节寄生虫:嗜酸性粒细胞常增高。
滑膜液中常见的细胞还有:
①类风湿性细胞:是中性粒细胞质中含10-20个直径在0.5-1.5μm的黑色颗粒,主要分布在细胞边缘,由IgM、IgG和补体组成,简称“RA”细胞。多见于类风湿性关节炎、痛风及化服性关节炎。
②LE细胞,可于体内形成,除SLE疾病外,少数类风湿性关节炎的滑膜液也可找到LE细胞。
案例一、
内三某病人,腹水常规结果:
浅黄,微浊,
蛋白:弱阳性
白细胞数:*/L
分类:
单个核细胞:95%
多个核细胞:5%
HF-BF%:12.8%
查见肿瘤细胞
而临床诊断为肝癌。
离心后,进行涂片,并瑞氏染色,镜检发现较多的胞体大、外形不规则、核浆比例失调的肿瘤细胞。
案例二、
内七某病人,腹水常规结果:
浅黄,微浊,
蛋白:弱阳性
细胞总数:*/L
分类:
单个核细胞:92%
多个核细胞:8%
HF-BF%:39.1%
离心后涂片,进行瑞氏染色,镜检发现该病人为较多的间皮细胞。
讨论
腹水形成必有因,在体液常规检查中发现恶性肿瘤细胞的重要环节是细胞计数和细胞分类。由于癌细胞常成堆成团脱落,在体液常规细胞计数时,尽管经过了稀释、混匀等操作步骤,仍呈现出癌细胞排列上的结构特点,如桑椹状、乳头状、腺腔样排列;癌细胞和肉瘤细胞(包括白血病细胞)都具有胞体大、外形不规则、核浆比例失调等共同特征,加上细胞计数时其独特的折光性,使恶性肿瘤细胞与炎性细胞及正常脱落的细胞有明显区别。恶性肿瘤细胞的确认有赖于沉淀物涂片染色镜检,细胞胞体增大且形状不规则、细胞核大而异形且染色质粗糙不均、核仁大且多、核浆比例严重失调等形态上的特点使恶性肿瘤细胞与其他细胞迥然不同。
体液中的细胞形态学检查,对于辅助临床诊断和指导临床治疗至关重要,甚至是明确诊断疾病的重要依据。良性与恶性浆膜腔积液的鉴别诊断一直是临床难题之一。脱落细胞学查找癌细胞是鉴别诊断的金标准,但该法费时、费力;应用肿瘤标志物鉴别积液性质,有助于提高其准确性,但又存在检测周期长、费用高等缺点,不利于积液性质早期筛查。Sysmex血液体液分析仪体液分析模式对浆膜腔积液标本进行肿瘤细胞筛查,参数HF?BF#和HF?BF%具有好的临床意义,可作为恶性体液的筛查指标。[4]对于检测高荧光细胞计数较高的临床标本,当高荧光细胞百分比[HF-BF%]5%的时候,应进行涂片染色镜检排除间皮细胞、巨噬细胞对于高荧光细胞的干扰,增强细胞计数准确性。
参考文献:
[1]陈松立,丁磊,叶廷军,等.血液分析仪XT?i筛检浆膜腔恶性积液的应用[J].诊断学理论与实践,,11(4):?.
[2]BOERK,DEUFELT,REINHOEFERM.EvaluationoftheXE?fortheautomatedanalysisofbloodcellsincerebrospinalfluid[J].ClinBiochem,,42(7?8):?.
[3]朱立强,赵利,朱玉秋,等.一种提高浆膜腔积液细胞学阳性检出率的简易制片方法[J].检验医学与临床,,8(17):?.
[4]李艳丽,朱立强,方先勇.SysmexXE?血细胞分析仪体液模式对胸腔积液和腹水肿瘤细胞的筛查作用[J].检验医学与临床,,9(24):?.
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